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    Olis光譜儀 CPL圓偏振熒光光譜儀 圓二色光譜儀 應用領域分析

    發布時間:2022-05-10   點擊次數:163次

    美國Olis光譜儀 CPL圓偏振熒光光譜儀 CD圓二色光譜儀 應用領域分析

     

    蛋白質二級結構

    在研究蛋白質折疊,蛋白質穩定性或酶活性時,蛋白質二級結構是重要的考慮因素。

    用于監視二級結構的強大工具是圓二色性(CD),它是左右圓偏振光的吸收差。由于蛋白質由手性氨基酸組成,因此它們具有CD活性,并顯示出對CD的二級結構敏感的獨特CD光譜。該光譜可以提供蛋白質結構的定性快照,或者可以使用多種算法從遠紫外CD光譜估算蛋白質的二級結構組成,其中一些算法可在Olis GlobalWorks軟件中獲得。

    蛋白質二級結構也可用于監測蛋白質折疊和解折疊。平衡研究包括隨溫度或化學變性劑增加而變化的CD光譜集合。隨著蛋白質的展開,CD光譜反映了這一點。在此變性過程中以單個波長或全光譜掃描擬合數據可提供熱力學信息,例如熔融溫度和展開焓。這兩個參數都提供了有關所研究蛋白質穩定性的重要信息。

    在DSM 17, DSM 20,DSM 1000,和多掃描支持蛋白質二級結構研究。CD 250 Peltier電池座等附件為進行這些實驗提供了一種便捷的方法。

    停止流

    蛋白質折疊和展開的動力學可以通過使用停止流附件進行監測??梢酝ㄟ^在停止流動反應過程中觀察信息波長的CD信號來研究蛋白質結構的毫秒變化。GlobalWorks還支持對這些動力學軌跡進行動力學分析。

    酶學

    酶催化的機制對生物化學領域的許多研究人員而言很重要。酶活性測量的常用方法包括監測酶和底物溶液隨時間變化的吸光度或熒光。隨著反應的進行,吸光度或熒光的變化報告了產物濃度的增加。

    穩態動力學

    穩態動力學測量涉及在整個測量過程中監測酶/底物復合物在恒定濃度下表現出的吸光度或熒光變化。幾種Olis儀器支持穩態動力學的測量。這些包括諸如HPDA 8452,Cary 14,Cary 17, DW2,DW2000,DB620和RSM 1000的吸收模型,以及諸如DM 45和DM 245的熒光模型。

    穩態前動力學

    穩態前動力學涉及測量酶/底物復合物的形成??梢詫⑼V沽髁扛郊砑拥酱蠖鄶荡祟悆x器中。其他配件包括TLC 50,四格珀耳帖(Peltier)炮塔和自動酶測定儀。Olis CLARiTY室為在高散射環境(例如全細胞或線粒體懸浮液中)中測量酶動力學提供了令人興奮的新可能性。

    DNA結構/構象

    DNA的結構和構象是研究DNA與蛋白質和其他DNA配體相互作用的重要考慮因素。確定DNA結構和構象的技術包括X射線晶體學,圓二色性(CD),熒光和紫外可見吸收光譜。除X射線晶體學外,所有這些技術均由Olis儀器提供支持。

    圓二色性

    DNA在200-250 nm區域表現出獨特的CD光譜,該光譜對DNA結構特別敏感。當添加擾動劑(例如溫度升高或DNA配體)時,CD光譜可用于探測DNA結構。典型的實驗包括在溫度升高或將配體添加到樣品中的同時收集光譜。

    所有Olis CD型號DSM 17,DSM 20,DSM 1000和Protein Machine都支持DNA的CD測量,并且包括諸如CD 250 Peltier溫控細胞架,用于配體結合的自動滴定儀和用于動力學研究的Stopped-Flow等附件。

    熒光性

    無論是直接來自DNA分子還是來自外部探針,熒光都是闡明DNA結構信息的有價值的技術。發射最大值和熒光強度變化揭示了有關DNA結構完整性的信息。結合熒光探針在結合DNA后顯示出極大的熒光強度增強,并且也是有用的DNA結構探針。熒光能量轉移(FRET),其中兩個具有重疊發射和激發光譜的探針連接到同一DNA分子。從供體染料轉移到受體染料的能量是兩者之間距離的函數。因此,FRET探針可以成為監測適當標記的DNA分子經歷的結構變化的有價值的工具。所有Olis Fluorescence型號DM 45,DM 245,SLM 8000,SPF-500,RSM 1000F和Cary熒光系統的理想配置是支持DNA的熒光研究。DSM 17,DSM 20和DSM 1000也可以配置用于CD和熒光研究。

    熒光各向異性

    熒光各向異性是熒光探針遷移率的量度,也可用于觀察DNA結構和構象。在該技術中,熒光探針被垂直偏振光激發,發射的偏振量與熒光壽命期間熒光探針的遷移率有關??焖僖苿拥奶结槍⑼耆O化(各向異性為零),而較慢的探針(例如與DNA結合的探針)將保持部分極化(非零各向異性)。Olis Polarization Toolbox附件為任何Olis熒光計(SLM系列除外)增加了各向異性功能。其他有用的附件包括TLC 50 Peltier池架,4池Peltier炮塔,自動滴定儀和Stopped-Flow。

    紫外線吸收

    DNA的紫外吸收光譜也揭示了有關DNA結構的重要信息。盡管由于結構差異而引起的變化通常很小,但是GlobalWorks中的Olis擬合算法甚至可以消除最小的光譜變化。該RSM 1000, OLIS 14/17和HPDA 8452支持的紫外-可見吸收光譜的集合到探針DNA結構。有用的附件包括TLC 40珀耳帖電池固定器和停止流。

    線粒體代謝

    光譜學的缺點之一,特別是影響吸收率的是光散射對測量的影響。高度散射的樣品將增加市場上絕大多數分光光度計的表觀吸收率。儀器無法區分散射光和吸收光。實際上,該偽影通常用于通過測量600 nm的表觀吸光度來大致定量細菌細胞培養物。

    渾濁樣品

    在1980年代,隨著Aminco DW2和后來的DW2000的推出,部分解決了這個問題。Olis仍然支持這些驚人的光學平臺。但是,Olis現在通過CLARiTY系列儀器在該設計上居于**地位,該儀器具有在存在高散射介質的情況下記錄真實吸收光譜的能力。Olis CLARiTY系列儀器非常適合監測線粒體懸浮液,整個細胞或其他高度散射環境中的吸光度變化。

    CLARiTY系列產品包括RSM 1000,DM 245和DB 620光學平臺。RSM 1000配置允許收集快速掃描,通常配置為每秒最多測量100次掃描。DM 245和DB 620配置為隨時間進行單個波長測量或用于常規吸光度掃描。CLARiTY室包括磁力攪拌和25至80 C temperature的溫度控制。常用附件包括TLC 50(用于RSM 1000),StepDisk(用于RSM 1000),Twin Peltier(用于DW2 / 2000)和熒光模塊(用于DW2 / 2000)。

    化學動力學

    反應動力學是實驗室和教室化學研究的重要組成部分。動力學分析的概念是許多本科化學課程的基礎,也是許多研究項目的基礎。Olis支持通過光譜學在紫外線,可見光或近紅外光譜區域內以微秒到小時的時間范圍監視反應。動力學反應可以通過多種方法觸發,包括手動混合,停止流混合或快速光解。但是,可以由TTL信號啟動的任何觸發器都可以集成到Olis系統中。

    吸光度和熒光

    強大的Olis動力學系統是RSM 1000,可以輕松配置以用于從深紫外到近紅外的任何波長范圍。其獲得的ScanDisk技術支持每秒最多收集1000次光譜掃描。為了以更適中的速率吸收光譜,HPDA 8452以高達10次掃描/秒的速度收集光譜掃描。RSM 1000,DB 620或HPDA 8452可用于單波長動態波長。

    的DM 45,DM 245,RSM 1000F,和SLM系列熒光計提供的能力來監控熒光反應為好。

    停流,閃光燈,LED,Peltier TLC 45,Peltier TLC 50和電磁攪拌器是這些測量的常用附件。

     

     

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